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[\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n
Autor: <\/strong><\/p>\n Sobre el autor:<\/strong><\/p>\n Informaci\u00f3n del manuscrito:<\/strong> Recibido\/Received: 20-11-24 Contacto de correspondencia:<\/strong> jorge.lopezd@udea.edu.com<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.0″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb text_font_size=\u00bb17px\u00bb header_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb header_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb header_font_size=\u00bb17px\u00bb background_color=\u00bb#7f7f7f\u00bb width=\u00bb50%\u00bb width_tablet=\u00bb40%\u00bb width_phone=\u00bb100%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbleft\u00bb min_height=\u00bb40px\u00bb custom_margin=\u00bb0px||||false|false\u00bb custom_padding=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_tablet=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_phone=\u00bb10px||10px|0px|false|false\u00bb custom_padding_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb text_orientation_tablet=\u00bb\u00bb text_orientation_phone=\u00bbcenter\u00bb text_orientation_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb module_alignment_tablet=\u00bbleft\u00bb module_alignment_phone=\u00bbcenter\u00bb module_alignment_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n I<\/span>ntroducci\u00f3n: <\/strong>Los anticuerpos de la infecci\u00f3n primaria por DENV pueden favorecer la infecci\u00f3n secundaria por serotipos heter\u00f3logos, a trav\u00e9s del mecanismo ADE, potenciando la entrada, replicaci\u00f3n viral y una respuesta inmune exacerbada, asociados con la gravedad del dengue. El objetivo del presente estudio fue establecer in vitro un modelo de infecci\u00f3n con los cuatro serotipos DENV, mediado por el mecanismo ADE. Metodolog\u00eda: Se realiz\u00f3 una curva de crecimiento con c\u00e9lulas VERO y U937 infectadas con cada serotipo de DENV a MOI de 1; de las 24\u201a hasta 96 hpi se recolectaron sobrenadantes para cuantificar part\u00edculas virales infecciosas por plaqueo y efecto citop\u00e1tico por MTT. Para el modelo DENV-ADE se realizaron mezclas virus: anticuerpos monoclonales de serotipos espec\u00edficos, inoculadas sobre las c\u00e9lulas U937 y 48 hpi se recolectaron sobrenadantes para cuantificar PVI. Las monocapas se usaron para determinar genoma viral (RT-qPCR) y prote\u00edna viral (CELL-ELISA). Adem\u00e1s, se evalu\u00f3 la expresi\u00f3n relativa de citoquinas por RT-qPCR. Resultados: El ECP de los cuatro serotipos fue mayor al 50 % en c\u00e9lulas VERO, en U937 DENV-3 y 4 causaron da\u00f1o celular hasta 96 hpi. La replicaci\u00f3n de DENV-1 y DENV-4 fue similar en ambas l\u00edneas celulares. DENV-2 present\u00f3 mayor replicaci\u00f3n 72 hpi en VERO y 96 hpi en U937. La mayor actividad replicativa para DENV-3 se obtuvo 72 hpi. Los Anti-DENV heterot\u00edpicos potenciaron las PVI por los serotipos DENV-1 y 2, y Anti-DENV-2 neutraliz\u00f3 la infecci\u00f3n por los cuatro serotipos.<\/p>\n En la infecci\u00f3n ADE-DENV-2, la expresi\u00f3n de IL-6 increment\u00f3 proporcionalmente con las PVI y TNF-a no present\u00f3 diferencias entre la infecci\u00f3n primaria y secundaria por DENV. Conclusiones:<\/strong> El ECP-DENV fue mayor en c\u00e9lulas VERO que en U937, la actividad replicativa mostr\u00f3 diferencias entre serotipos y l\u00edneas celulares. En la infecci\u00f3n por ADE, DENV-1 y DENV-2 potenciaron la producci\u00f3n de PVI por anticuerpos heterot\u00edpicos y la expresi\u00f3n de IL-6 increment\u00f3 en la infecci\u00f3n ADE-DENV-2.<\/p>\n Palabras clave: dengue, virus, ADE, serotipos, anticuerpos<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.0″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb text_font_size=\u00bb17px\u00bb header_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb header_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb header_font_size=\u00bb17px\u00bb background_color=\u00bb#7f7f7f\u00bb width=\u00bb50%\u00bb width_tablet=\u00bb40%\u00bb width_phone=\u00bb100%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbleft\u00bb min_height=\u00bb40px\u00bb custom_margin=\u00bb0px||||false|false\u00bb custom_padding=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_tablet=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_phone=\u00bb10px||10px|0px|false|false\u00bb custom_padding_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb text_orientation_tablet=\u00bb\u00bb text_orientation_phone=\u00bbcenter\u00bb text_orientation_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb module_alignment_tablet=\u00bbleft\u00bb module_alignment_phone=\u00bbcenter\u00bb module_alignment_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Abstract<\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb custom_padding=\u00bb16px|||||\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n I<\/span>ntroduction: <\/strong>Antibodies from primary DENV infection can promote secondary infection with heterologous serotypes through the ADE mechanism, enhancing viral entry, replication, and an exacerbated immune response, all associated with dengue severity. Keywords: DENV, ADE, serotypes, antibodies<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.0″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb text_font_size=\u00bb17px\u00bb header_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb header_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb header_font_size=\u00bb17px\u00bb background_color=\u00bb#7f7f7f\u00bb width=\u00bb50%\u00bb width_tablet=\u00bb40%\u00bb width_phone=\u00bb100%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbleft\u00bb min_height=\u00bb40px\u00bb custom_margin=\u00bb0px||||false|false\u00bb custom_padding=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_tablet=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_phone=\u00bb10px||10px|0px|false|false\u00bb custom_padding_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb text_orientation_tablet=\u00bb\u00bb text_orientation_phone=\u00bbcenter\u00bb text_orientation_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb module_alignment_tablet=\u00bbleft\u00bb module_alignment_phone=\u00bbcenter\u00bb module_alignment_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Introducci\u00f3n<\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n E<\/span><\/strong>l virus del dengue (DENV) es un flavivirus transmitido a los humanos por los mosquitos del g\u00e9nero Aedes principalmente Aedes aegypti. La arbovirosis producida por este virus es una de las infecciones con mayor prevalencia en las \u00e1reas tropicales y subtropicales del planeta, implicando un importante impacto en t\u00e9rminos de carga y costos de enfermedad para los pa\u00edses end\u00e9micos (1). El dengue es causado por cuatro serotipos diferentes del virus (DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4) (2), que, al contraer la infecci\u00f3n por un serotipo, se generan anticuerpos neutralizantes espec\u00edficos que confieren inmunidad de por vida contra ese serotipo, fen\u00f3meno conocido como inmunidad homot\u00edpica (3,4). Estos anticuerpos tambi\u00e9n pueden reaccionar de forma cruzada con los otros tres serotipos (inmunidad heterot\u00edpica), pero con el tiempo los t\u00edtulos pueden caer por debajo de los niveles neutralizantes, favoreciendo el desarrollo de la infecci\u00f3n secundaria y las formas graves de la enfermedad (5,6).<\/p>\n Se han propuesto diferentes hip\u00f3tesis para explicar los mecanismos asociados con la gravedad del dengue, entre ellas la asociaci\u00f3n de una infecci\u00f3n previa por un serotipo de DENV que confiere la preexistencia de anticuerpos potenciadores. Adem\u00e1s, la sobreproducci\u00f3n de citoquinas proinflamatorias por la activaci\u00f3n de fagocitos mononucleares (monocitos, macr\u00f3fagos y c\u00e9lulas dendr\u00edticas) c\u00e9lulas B y c\u00e9lulas T con reacci\u00f3n cruzada en la respuesta a la infecci\u00f3n por DENV. Sin embargo, los mecanismos fisiopatol\u00f3gicos asociados con la evoluci\u00f3n a complicaciones cl\u00ednicas, no se han dilucidado completamente (4,7).<\/p>\n La infecci\u00f3n potenciada por anticuerpos o ADE, por sus siglas en ingl\u00e9s (Antibody Dependent Enhacement), postula que el virus causante de la infecci\u00f3n secundaria es reconocido por los anticuerpos generados en una infecci\u00f3n previa (infecci\u00f3n primaria); sin capacidad de neutralizarlo. Por el contrario, el virus es capaz de ingresar a las c\u00e9lulas susceptibles mediante receptores Fc gamma (Fc-y), los cuales se encuentran en la superficie de c\u00e9lulas inmunes, que reconocen la porci\u00f3n Fc de las inmunoglobulinas G (IgG) y a su vez desencadenan una amplia gama de funciones efectoras (8). La fagocitosis mediada por estos receptores facilita el ingreso del virus; lo cual genera un aumento en la replicaci\u00f3n viral e induce modificaciones en la respuesta inmune celular con un incremento en la secreci\u00f3n de citocinas, que contribuyen en la patogenia del dengue (9,10).<\/p>\n Las c\u00e9lulas U937 obtenidas a partir de linfoma histioc\u00edtico, son una l\u00ednea celular tipo monocito-macr\u00f3fago que permite estudiar la infecci\u00f3n por el DENV. Estas c\u00e9lulas tambi\u00e9n permiten el an\u00e1lisis de prote\u00ednas involucradas de manera directa con la respuesta inmune ante el virus.<\/p>\n (11). Este modelo celular tambi\u00e9n ha permitido realizar estudios de inmunomodulaci\u00f3n y evaluar compuestos con potencial antiviral. Adem\u00e1s, expresan receptores tipo FCG lo que permite usarlas en sistemas de infecci\u00f3n mediados por anticuerpos y con ello poder estudiar aspectos relacionados tanto con la infecci\u00f3n primaria como secundaria por DENV (12).<\/p>\n Las c\u00e9lulas VERO derivadas de ri\u00f1\u00f3n de mono verde africano, adherentes y con morfolog\u00eda epitelial, constituyen uno de los principales modelos celulares en estudios de infecciones con DENV, debido a la alta permisividad a la infecci\u00f3n por flavivirus, facilitando el estudio de la replicaci\u00f3n viral sin la interferencia de mecanismos antivirales naturales como la respuesta de interfer\u00f3n tipo I, ya que dichas c\u00e9lulas presentan una deleci\u00f3n en el cromosoma que contiene los genes para la producci\u00f3n de esta citoquina. Tambi\u00e9n es una l\u00ednea celular ampliamente utilizada y estandarizada, lo que permite comparar resultados y el dise\u00f1o de protocolos comunes en la investigaci\u00f3n biom\u00e9dica (13).<\/p>\n En este contexto, en el presente trabajo se realiz\u00f3 una caracterizaci\u00f3n de la infecci\u00f3n de cada serotipo DENV, en t\u00e9rminos de efecto citop\u00e1tico y actividad replicativa en las l\u00edneas celulares U937 y VERO. Adem\u00e1s, se estableci\u00f3 un modelo de infecci\u00f3n con los cuatro serotipos de DENV en c\u00e9lulas U937, basado en el mecanismo ADE, permitiendo evaluar el comportamiento de la infecci\u00f3n en presencia y ausencia de anticuerpos Anti-DENV y a la vez permitir a mediano plazo hacer investigaciones enfocadas en la comprensi\u00f3n de la fisiopatog\u00e9nesis de la infecci\u00f3n mediada por anticuerpos; la identificaci\u00f3n de biomarcadores pron\u00f3sticos, dianas terap\u00e9uticas espec\u00edficas y\/o la b\u00fasqueda de agentes antivirales, y con ello contribuir no solo a un mejor entendimiento del mecanismo; sino tambi\u00e9n al desarrollo de estrategias de control y prevenci\u00f3n eficaces contra el dengue.<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.0″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb text_font_size=\u00bb17px\u00bb header_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb header_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb header_font_size=\u00bb17px\u00bb background_color=\u00bb#7f7f7f\u00bb width=\u00bb50%\u00bb width_tablet=\u00bb40%\u00bb width_phone=\u00bb100%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbleft\u00bb min_height=\u00bb40px\u00bb custom_margin=\u00bb0px||||false|false\u00bb custom_padding=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_tablet=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_phone=\u00bb10px||10px|0px|false|false\u00bb custom_padding_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb text_orientation_tablet=\u00bb\u00bb text_orientation_phone=\u00bbcenter\u00bb text_orientation_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb module_alignment_tablet=\u00bbleft\u00bb module_alignment_phone=\u00bbcenter\u00bb module_alignment_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n M\u00e9todos<\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Mantenimiento de l\u00edneas celulares VERO\/U937<\/strong><\/p>\n L<\/span><\/strong>as c\u00e9lulas derivadas de ri\u00f1\u00f3n de mono (VERO), obtenidas de la American Type Culture Collection (ATCC) CCL-81TM y la l\u00ednea celular de monocitos subcl\u00f3n adherentes obtenidas a partir de linfoma histioc\u00edtico (U937) se cultivaron en Dulbecco Modified Eagles Minimal (DMEM) suplementado con 2 % de suero fetal bovino (SFB), 0.25 \u03bcg\/mL de anfotericina B (GIBCO), 100 \u03bcg\/mL de estreptomicina (GIBCO), 100 U\/mL de penicilina (GIBCO). Ambas l\u00edneas celulares fueron mantenidas en incubaci\u00f3n a 37 \u00b0C con atm\u00f3sfera de CO\u2082 al 5 % y humedad relativa hasta alcanzar su m\u00e1xima confluencia. Posteriormente, se hizo pase celular para lo cual se us\u00f3 tripsinaEDTA (Sigma-Aldrich) al 0.25 para lograr desprendimiento de la monocapa, la tripsina se inactiv\u00f3 con un volumen duplicado de DMEM 10 % SFB. El bot\u00f3n de c\u00e9lulas se resuspendi\u00f3 en 1 mL de DMEM 10 % SFB y se cont\u00f3 para hacer las siembras necesarias para los experimentos.<\/p>\n Virus<\/strong><\/p>\n Se us\u00f3 una cepa de referencia de cada serotipo de DENV. Las cepas DENV-1\/West Pac 74, genotipo IV, DENV-2\/S16803, genotipo asi\u00e1tico-americano, DENV-3\/CH53489, genotipo III y DENV-4\/TVP360, genotipo II se reprodujeron en c\u00e9lulas VERO para cosechar virus para los diferentes experimentos. Se hicieron siembras de 5×10\u2076 c\u00e9lulas en botellas de 75 cm\u00b2, las cuales se incubaron 24 h a 37 \u00b0C para alcanzar una confluencia aproximadamente del 80 %, luego se infectaron con 1 200 \u00b5l del in\u00f3culo viral y se incub\u00f3 por 2 h a 37 \u00b0C a fin de lograr la internalizaci\u00f3n del virus en las c\u00e9lulas, posteriormente se complet\u00f3 un volumen de 15 mL con DMEM 2 % SFB para una incubaci\u00f3n a 37 \u00b0C hasta observar efecto citop\u00e1tico (ECP) producto de la replicaci\u00f3n viral. La recolecci\u00f3n del virus se hizo entre el d\u00eda 6-8 postinfecci\u00f3n; se realiz\u00f3 un desprendimiento de la monocapa celular y la suspensi\u00f3n se trasvas\u00f3 en un tubo c\u00f3nico est\u00e9ril, se centrifug\u00f3 a 2 000 rpm por 10 min a temperatura de refrigeraci\u00f3n (4 \u00b0C). El sobrenadante obtenido se suplement\u00f3 con 30 % de SFB y se realizaron al\u00edcuotas de los diferentes lotes virales para su crioconservaci\u00f3n a -80 \u00b0C. El t\u00edtulo viral (UFP\/mL) se determin\u00f3 por ensayo de placa y la serotipificaci\u00f3n se confirm\u00f3 por PCR en tiempo real.<\/p>\n Anticuerpos monoclonales Anti-DENV<\/strong><\/p>\n Los anticuerpos usados en el presente estudio fueron donados por el Center for Diseases (CDC) de los Estados Unidos de Am\u00e9rica: Anti-DENV-1 (MAB D2-1F1-3); Anti-DENV-2 (MAB 3H5-1-21); Anti-DENV-3 (MAB-D6-8A1-12); y Anti-DENV-4 (MAB 1H10-6-7).<\/p>\n Estos son anticuerpos monoclonales (mAb), cuyo origen biol\u00f3gico es a partir de rat\u00f3n, siendo una inmunoglobulina purificada de isotipo IgG1, que reconocen el dominio III de la prote\u00edna E de DENV. Caracterizados por ser de tipo-espec\u00edfico y han sido usados en ensayos de neutralizaci\u00f3n (PRNT), ADE e identificaci\u00f3n serol\u00f3gica. En el presente trabajo se utiliz\u00f3 una sola concentraci\u00f3n de Acs equivalente a 25 ng\/\u00b5L, la cual se obtuvo con base a reportes de ensayos previos.<\/p>\n Ensayo de viabilidad celular para determinar el efecto citop\u00e1tico de los cuatro serotipos DENV<\/strong><\/p>\n La viabilidad de las c\u00e9lulas VERO y U937 se determin\u00f3 mediante la t\u00e9cnica de MTT (SigmaAldrich), la cual se basa en la reducci\u00f3n metab\u00f3lica de la sal 3-4,5-dimetil-2-tiazolil-2,5difenil-2H-bromuro de tetrazol (tetrazolio) por acci\u00f3n de la enzima succinato deshidrogenasa al convertirla en un compuesto insoluble de color azul (Formaz\u00e1n) cuya concentraci\u00f3n es directamente proporcional a la actividad metab\u00f3lica y, por lo tanto, a la viabilidad celular.<\/p>\n Se sembraron 3×10\u2074 c\u00e9lulas VERO y 1.5×10\u2074 c\u00e9lulas U937 por pozo con DMEM al 2 % SFB en placas de 96 pozos, 24 h posterior a la siembra se infectaron con los serotipos de DENV a MOI de 1 y se incubaron hasta las 96 h posterior a la infecci\u00f3n a 37 \u00b0C y 5 % de CO\u2082.<\/p>\n Seguidamente, se retir\u00f3 el medio y se hicieron dos lavados con PBS 1X, se agreg\u00f3 50 \u00b5l de MTT por pozo a una concentraci\u00f3n de 0.5 mg\/mL, se protegi\u00f3 de la luz y se incub\u00f3 durante 2 horas a 37 \u00b0C. Luego se adicion\u00f3 100 \u00b5L de DMSO, el cual act\u00faa como disolvente de los cristales de formaz\u00e1n y se incub\u00f3 por 15 minutos a Temperatura Ambiente (TA).<\/p>\n Posteriormente, se procedi\u00f3 hacer la lectura espectrofotom\u00e9trica a una densidad \u00f3ptica (DO) de 450 nm en el equipo Multiskan\u2122 FC Microplate Photometer (Thermo Scientific), las absorbancias obtenidas se usaron para calcular la viabilidad celular, las DO de los controles sin virus (CSV) representan el 100 % de viabilidad. Cada ensayo se realiz\u00f3 en dos unidades experimentales (UE) independientes con cuatro r\u00e9plicas cada una (n: 8). El efecto citop\u00e1tico (ECP) de DENV se expres\u00f3 como la reducci\u00f3n en la viabilidad celular causada por cada uno de los serotipos DENV, aplicando la siguiente formula ECP= 100 \u2013 viabilidad celular (%), donde un 0 % de ECP indica que la infecci\u00f3n no afect\u00f3 la viabilidad.<\/p>\n Curva de replicaci\u00f3n de los 4 serotipos DENV en c\u00e9lulas VERO y U937<\/strong><\/p>\n Se hicieron siembras de 8×10\u2074 c\u00e9lulas VERO y 6×10\u2074 c\u00e9lulas U937 por pozo en DMEM al 2 % SFB en placas de 24 pozos. Luego de 24 horas, se infectaron con cada una de las cepas de los serotipos DENV a una MOI de 1 y se incub\u00f3 2 h a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082. Luego se retir\u00f3 el in\u00f3culo viral y se agreg\u00f3 medio fresco (DMEM 2 %) y se incubaron 0, 24, 48, 72 y 96 h a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082. Al completar cada uno de los tiempos antes descritos, se recolectaron los sobrenadantes, los cuales se usaron para cuantificar part\u00edculas virales infecciosas por t\u00e9cnica de plaqueo. Las monocapas fueron lavadas con PBS 1x y se crioconservaron a -80 \u00b0C. Cada ensayo se realiz\u00f3 en dos UE independientes (n: 6) con tres r\u00e9plicas cada una.<\/p>\n Modelo de infecci\u00f3n in vitro con los cuatro serotipos DENV, mediado por el mecanismo de potenciaci\u00f3n dependiente de anticuerpos<\/strong><\/p>\n El establecimiento del modelo de infecci\u00f3n in vitro con los cuatro serotipos DENV se realiz\u00f3 en c\u00e9lulas U937. Se hicieron siembras de 1.5×10\u2074 c\u00e9lulas por pozo con DMEM 2 % SFB en placas de 96 pozos, 24 h despu\u00e9s, las c\u00e9lulas se infectaron con los in\u00f3culos de cada condici\u00f3n experimental incluidas en el modelo. Se us\u00f3 una MOI de 0.5 y una sola concentraci\u00f3n de anticuerpos monoclonales serotipo-espec\u00edfico de 25 ng\/\u00b5L [80, 81].<\/p>\n Condiciones experimentales del modelo de infecci\u00f3n DENV-ADE<\/strong><\/p>\n Controles de infecci\u00f3n:<\/strong> Corresponden a la de infecci\u00f3n en ausencia de anticuerpos tambi\u00e9n denominado infecci\u00f3n primaria. Se hicieron mezclas de cada uno de los serotipos DENV (DENV1-4) (MOI de 0.5) en DMEM 2 % SFB y se incubaron durante 1 h a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082.<\/p>\n Control de neutralizaci\u00f3n:<\/strong> Cada uno de los serotipos DENV (MOI de 0.5) se mezcl\u00f3 con sus respectivos anticuerpos homot\u00edpicos (concentraci\u00f3n de 25 ng\/\u00b5L) a una relaci\u00f3n 1:1 en DMEM 2 % SFB y se incubaron 1 h a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082.<\/p>\n Infecci\u00f3n dependiente de anticuerpos:<\/strong> Se hicieron mezclas 1:1 de cada uno de los serotipos DENV (MOI de 0.5) con sus correspondientes anticuerpos heterot\u00edpicos (concentraci\u00f3n de 25 ng\/\u00b5L), usando DMEM 2 % SFB y se incubaron 1 h a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082, para garantizar la formaci\u00f3n de los inmunocomplejos (IC) virus\/anticuerpo.<\/p>\n Cada una de las mezclas antes descritas se inocularon sobre las c\u00e9lulas U937 y se incubaron por 2 h a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082. Posteriormente, se retir\u00f3 el in\u00f3culo y se agreg\u00f3 medio fresco (DMEM 2 % SFB) para una incubaci\u00f3n de 48 h a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082. Luego de este tiempo, se procedi\u00f3 a recolectar sobrenadantes, los cuales se crioconservaron y se usaron para cuantificar part\u00edculas virales infecciosas por ensayo de placa. Las monocapas se lavaron y se les agreg\u00f3 200 \u00b5l de PBS1x por pozo para conservarse a -80 \u00b0C y posteriormente determinar copias gen\u00f3micas virales y expresi\u00f3n relativa de citocinas por PCR tiempo real. Adem\u00e1s, las monocapas celulares se fijaron con PFA al 4 % para determinar prote\u00edna viral por CELLELISA. Se realizaron dos unidades experimentales independientes cada una con un n=4.<\/p>\n Cuantificaci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas<\/strong><\/p>\n La cuantificaci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas a partir de sobrenadantes recolectados de las curvas de replicaci\u00f3n DENV y del modelo de infecci\u00f3n DENV-ADE se hizo por titulaci\u00f3n viral con la t\u00e9cnica de plaqueo. Se sembraron 8×10\u2074 c\u00e9lulas VERO por pozo con DMEM al 2 % SFB en placas de 24 pozos y se incubaron a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082 durante 24 h. Posterior a la siembra se hicieron diluciones seriadas en base 10 de los sobrenadantes y se inocul\u00f3 200 uL de cada diluci\u00f3n sobre la monocapa celular; se incub\u00f3 por 2 h a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082, se retir\u00f3 el in\u00f3culo viral y se adicion\u00f3 1 mL de Carboximetilcelulosa (Sigma-Aldrich) CMC\/DMEM 1.5 % \/1X SFB al 2 %. Las titulaciones se dejaron incubando a 37 \u00b0C y 5 % CO\u2082 durante 9 d\u00edas, luego se retir\u00f3 el medio semis\u00f3lido y se hicieron lavados con PBS 1X. Las monocapas se fijaron usando 400 \u00b5L de paraformaldeh\u00eddo (PFA) al 4 % y se incub\u00f3 a TA por 30 min.<\/p>\n Finalmente, se retir\u00f3 el PFA y se hizo la tinci\u00f3n usando cristal violeta el cual se dej\u00f3 actuar por 10 minutos, se retir\u00f3 el colorante y las monocapas se lavaron con agua. Los pozos se dejaron secar para hacer el conteo de unidades formadoras de placas (UFP) y poder cuantificar las part\u00edculas virales infecciosas.<\/p>\n Cuantificaci\u00f3n de prote\u00edna viral intracelular<\/strong><\/p>\n La cuantificaci\u00f3n de prote\u00edna viral en el ensayo DENV-ADE se realiz\u00f3 por la t\u00e9cnica de CELL-ELISA. Cuantificaci\u00f3n de genoma viral<\/strong><\/p>\n La extracci\u00f3n del RNA viral se hizo a partir de monocapas celulares de cada una de las condiciones experimentales incluidas en el modelo de infecci\u00f3n DENV-ADE usando el kit MGIEasy nucleic acid extration, siguiendo el protocolo descrito por el fabricante. La calidad y cantidad del RNA se determin\u00f3 en un espectrofot\u00f3metro NANODROP\u2122 ONE\/ONEC (Thermo Fisher Scientific\u00ae). La s\u00edntesis de cDNA a partir de RNA se hizo con el kit High Capacity cDNA reverse transcription (Thermo Fisher Scientific\u00ae).<\/p>\n La cuantificaci\u00f3n del genoma viral se hizo por PCR tiempo real (qPCR) utilizando el kit PowerUp\u2122 SYBR Green Master Mix (Thermofisher Scientific\u00ae). El perfil t\u00e9rmico utilizado en el equipo QuantStudio design para los cuatro serotipos DENV fue 95 \u00b0C por 5 min, 35 ciclos (95 \u00b0C por 30 s, 55 \u00b0C por 45 s, 72 \u00b0C por 45 s) con una extensi\u00f3n final a 72 \u00b0C por 10 min. Los cebadores usados para cada serotipo DENV amplifican un fragmento de la regi\u00f3n C-prM. Los cebadores para DENV-2 amplifican una regi\u00f3n de 119 pb.<\/p>\n Los cebadores para DENV-3 amplifican una regi\u00f3n de 288 pb.<\/p>\n Los cebadores para DENV-4 amplifican una regi\u00f3n de 260 pb.<\/p>\n Los resultados de la qPCR se analizaron en el programa QuantStudio design & analysis software. Para la cuantificaci\u00f3n absoluta de copias gen\u00f3micas virales se usaron pl\u00e1smidos recombinantes.<\/p>\n La normalidad de los datos se determin\u00f3 por la prueba de Shapiro Wilk. La homocesticidad de las varianzas se determin\u00f3 por el test de Bartlet. La significancia estad\u00edstica se identific\u00f3 usando la prueba param\u00e9trica t-Student (datos con distribuci\u00f3n normal) o la prueba no param\u00e9trica U de Mann Whitney (datos con distribuci\u00f3n no normal), considerando para todos los casos diferencias estad\u00edsticamente significativas con un valor p menor a 0.05 (p<0.05).<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb text_font_size=\u00bb17px\u00bb header_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb header_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb header_font_size=\u00bb17px\u00bb background_color=\u00bb#7f7f7f\u00bb width=\u00bb50%\u00bb width_tablet=\u00bb40%\u00bb width_phone=\u00bb100%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbleft\u00bb min_height=\u00bb40px\u00bb custom_margin=\u00bb0px||||false|false\u00bb custom_padding=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_tablet=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_phone=\u00bb10px||10px|0px|false|false\u00bb custom_padding_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb text_orientation_tablet=\u00bb\u00bb text_orientation_phone=\u00bbcenter\u00bb text_orientation_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb module_alignment_tablet=\u00bbleft\u00bb module_alignment_phone=\u00bbcenter\u00bb module_alignment_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n An\u00e1lisis estad\u00edsticos<\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n P<\/span><\/strong>ara determinar los porcentajes de efecto citop\u00e1tico, se hicieron comparaciones entre las c\u00e9lulas no infectadas con virus (CSV) y las c\u00e9lulas infectadas con cada uno de los serotipos DENV. Tambi\u00e9n un an\u00e1lisis de correlaci\u00f3n entre el efecto citop\u00e1tico para cada serotipo con la prueba de Kruskal Wallis.<\/p>\n En los an\u00e1lisis derivados del modelo de infecci\u00f3n DENV-ADE, se hicieron comparaciones entre los controles de infecci\u00f3n primaria (c\u00e9lulas infectadas con cada serotipo DENV) y las infecciones en presencia de anticuerpos homot\u00edpicos y heterotipicos. Tambi\u00e9n se hicieron comparaciones de la actividad replicativa de cada uno de los serotipos a diferentes tiempos posinfecci\u00f3n, entre las l\u00edneas celulares U937 y VERO, para lo cual se us\u00f3 la prueba t-Student con correcci\u00f3n de Welch.<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.0″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb text_font_size=\u00bb17px\u00bb header_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb header_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb header_font_size=\u00bb17px\u00bb background_color=\u00bb#7f7f7f\u00bb width=\u00bb50%\u00bb width_tablet=\u00bb40%\u00bb width_phone=\u00bb100%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbleft\u00bb min_height=\u00bb40px\u00bb custom_margin=\u00bb0px||||false|false\u00bb custom_padding=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_tablet=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_phone=\u00bb10px||10px|0px|false|false\u00bb custom_padding_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb text_orientation_tablet=\u00bb\u00bb text_orientation_phone=\u00bbcenter\u00bb text_orientation_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb module_alignment_tablet=\u00bbleft\u00bb module_alignment_phone=\u00bbcenter\u00bb module_alignment_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Resultados<\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n 1. El efecto citop\u00e1tico del virus dengue es diferente entre serotipos y poblaci\u00f3n celular infectada<\/strong><\/p>\n E<\/span><\/strong>l \u00a0ECP producido por cada uno de los serotipos del DENV sobre las c\u00e9lulas VERO y U937 se determin\u00f3 por la t\u00e9cnica de MTT luego de 96 horas posinfecci\u00f3n a una MOI de 1. En la l\u00ednea celular VERO, DENV-1 indujo un ECP del 55.7 %, DENV-2 del 53.3 %, DENV-3 del 54 % y DENV-4 caus\u00f3 un ECP del 48.9 % (Figura 1A). En los monocitos adherentes (U937) los serotipos DENV-1 y DENV-2 no generaron ECP luego de 96 hpi; en cambio DENV-3 gener\u00f3 un ECP del 16.4 % y DENV-4 del 19.3 % (Figura 1B). El ECP causado por DENV fue mayor sobre las c\u00e9lulas VERO en comparaci\u00f3n con las U937, estos resultados indican que el da\u00f1o celular causado por DENV es diferente entre las poblaciones celulares permisibles a la infecci\u00f3n, as\u00ed como entre los serotipos infectantes. Los resultados de la viabilidad como una medida indirecta del ECP fueron estad\u00edsticamente significativos frente al control de c\u00e9lulas no infectadas.<\/p>\n Figura1<\/strong>. Efecto citop\u00e1tico de los cuatro serotipos DENV en c\u00e9lulas VERO (A) y c\u00e9lulas U937 (B) a las 96 hpi. Los porcentajes relativos de ECP fueron calculados de acuerdo a los resultados obtenidos en la t\u00e9cnica de MTT. En todos los casos, se asumi\u00f3 que el control sin virus representa el 0 % de ECP. Los asteriscos indican diferencias estad\u00edsticamente significativas con respecto al control sin virus (*p<0,5 **p<0,01) y las barras de error indican el error est\u00e1ndar de la media (n: 8).<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_image src=\u00bbhttps:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/fig-1.png\u00bb title_text=\u00bbfig 1″ align=\u00bbcenter\u00bb _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb width=\u00bb100%\u00bb max_width=\u00bb100%\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb max_height=\u00bb350px\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb custom_padding=\u00bb||0px|||\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n 2. La actividad replicativa de DENV es diferente entre los serotipos y la poblaci\u00f3n <\/strong>celular infectada<\/strong><\/p>\n La actividad replicativa de los cuatro serotipos DENV en c\u00e9lulas VERO y U937 se determin\u00f3 por cuantificaci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas a partir de titulaciones de sobrenadantes recolectados a diferentes tiempos posinfecci\u00f3n 0, 24, 48, 72 y 96 h. Los serotipos DENV-1 y DENV-4 presentaron mayor actividad replicativa a las 96 hpi en ambas l\u00edneas celulares (Figura 2A, 2D). La replicaci\u00f3n de DENV-2 fue diferente entre las dos poblaciones celulares; en c\u00e9lulas VERO la mayor producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas se produjo a las 72hpi, 2.6×10\u2076 UFP\/mL; en cambio en las c\u00e9lulas U937 a las 96 hpi,1.8×10\u2076 UFP\/mL. (Figura2B.) DENV-3 present\u00f3 su mayor actividad replicativa a las 72 hpi en c\u00e9lulas VERO, 2.3×10\u2076 UFP\/mL y en U937, 3.2×10\u2076 UFP\/mL (Figura 2C.) En general en c\u00e9lulas U937, se observ\u00f3 la mayor replicaci\u00f3n viral a las 96 hpi, para los serotipos DENV-1, DENV-2 y DENV-4 con excepci\u00f3n de DENV-3 que mostr\u00f3 la m\u00e1xima producci\u00f3n de PVI a las 72hpi y evidenci\u00f3 una disminuci\u00f3n replicativa del 12.3 % a las 96hpi. En las c\u00e9lulas VERO; DENV-1 y DENV4 present\u00f3 mayor replicaci\u00f3n a las 96 hpi y los serotiposDENV-2 y DENV-3 a las 72 hpi.<\/p>\n Al comparar la replicaci\u00f3n entre ambas l\u00edneas celulares, se observ\u00f3 que DENV-2 gener\u00f3 mayor producci\u00f3n de PVI en c\u00e9lulas VERO y DENV-3 en Por su parte, DENV-1 y 4 no presentaron diferencias significativas en la producci\u00f3n de PVI entre ambas poblaciones celulares hasta las 96 hpi.<\/p>\n Figura 2.<\/strong> Actividad replicativa de los cuatro serotipos DENV en c\u00e9lulas VERO y U937 a las 0, 24, 48, 72 y 96 hpi. Los resultados se calcularon a partir de la cuantificaci\u00f3n de unidades formadoras de placas obtenidos por la t\u00e9cnica de plaqueo (UFP\/mL). En todas las condiciones experimentales las c\u00e9lulas se infectaron con cada uno de los serotipos DENV a MOI de 1 y se incubaron a diferentes tiempos posinfecci\u00f3n. Se llevaron a cabo dos experimentos independientes con tres r\u00e9plicas cada uno (n:6). Las barras de error indican el error est\u00e1ndar de la media.<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_image src=\u00bbhttps:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/fig-2.png\u00bb title_text=\u00bbfig 2″ align=\u00bbcenter\u00bb _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb max_height=\u00bb550px\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb custom_padding=\u00bb||0px|||\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n 3. La infecci\u00f3n por DENV-1 y DENV-2 se potencia en presencia de anticuerpos AntiDENV heterot\u00edpicos<\/strong><\/p>\n Para determinar la potenciaci\u00f3n de la infecci\u00f3n de cada uno de los serotipos DENV dependiente de anticuerpos; utilizamos anticuerpos heterot\u00edpicos Anti-DENV de tipo IgG, los cuales se mezclaron con cada uno de los serotipos DENV para formar inmunocomplejos Virus-Anticuerpos, los cuales son fagocitados por las c\u00e9lulas U937; permitiendo la entrada viral y posterior aumento de la replicaci\u00f3n, fen\u00f3meno conocido como amplificaci\u00f3n de la infecci\u00f3n dependiente de anticuerpos (ADE). La cuantificaci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas (UFP\/mL) evidenci\u00f3 que la infecci\u00f3n por DENV-1 se potenci\u00f3 en presencia de Anti-DENV-3 (2, 9 veces) y con Anti-DENV-4 (3, 2 veces), la concentraci\u00f3n de AntiDENV-2 usada neutraliz\u00f3 la infecci\u00f3n por DENV-1, al igual que el anticuerpo homot\u00edpico Anti-DENV-1. (Figura 3). La infecci\u00f3n por DENV-2 se amplific\u00f3 con los anticuerpos Anti-DENV-1 (5, 8 veces), Anti-DENV-3 (6, 8 veces) y Anti-DENV-4 (90 veces), la infecci\u00f3n se neutraliz\u00f3 en un 100 % en presencia de anticuerpos homot\u00edpicos Anti-DENV-2. (Figura4) La concentraci\u00f3n usada de anticuerpos Anti-DENV-heterot\u00edpicos no potenciaron la infecci\u00f3n por los serotipos DENV-3 y DENV-4 reflejando una neutralizaci\u00f3n de esta. (Figura 5 y 6) El anticuerpo Anti-DENV-2 mostr\u00f3 un papel neutralizante para los 4 serotipos DENV. La producci\u00f3n de prote\u00edna viral no se vio afectada por el mecanismo de infecci\u00f3n dependiente de anticuerpos y se correlacionan con los hallazgos antes descritos. Estos resultados permiten dilucidar el mecanismo de infecci\u00f3n ADE para DENV; como uno de los aspectos fundamentales en la comprensi\u00f3n de la fisiopatogenia de la enfermedad y a la vez caracterizar la infecci\u00f3n tanto primaria como secundaria asociada a este arbovirus y sus serotipos. Este modelo de infecci\u00f3n permitir\u00e1 a la vez establecer otros estudios relacionados con la respuesta inmune, antivirales y vacunas contra el dengue lo cual sigue siendo objeto de investigaci\u00f3n hasta la fecha.<\/p>\n Figura 3. Infecci\u00f3n por DENV-1 mediada por el mecanismo dependiente de anticuerpos. Los porcentajes relativos de infecci\u00f3n fueron calculados a partir de los resultados obtenidos por la t\u00e9cnica de plaqueo (UFP\/mL) de sobrenadantes colectados del sistema de infecci\u00f3n ADE-DENV-1 (A), CELL-ELISA (B) y qPCR (C) de las monocapas celulares. En todos los casos, el control representa la infecci\u00f3n sin anticuerpos o compuesto, que se asumi\u00f3 como 100 % de infecci\u00f3n. Los asteriscos indican diferencias estad\u00edsticamente significativas respecto al control. (*p<0.5, **p<0.01, ***p<0.001 t-Student) y las barras de error indican el error est\u00e1ndar de la media (n:4).\u00a0<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_image src=\u00bbhttps:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/fig-3.png\u00bb title_text=\u00bbfig 3″ align=\u00bbcenter\u00bb _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb max_height=\u00bb350px\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb custom_padding=\u00bb||0px|||\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Figura 4.<\/strong> Infecci\u00f3n por DENV-2 mediada por el mecanismo dependiente de anticuerpos. Los porcentajes relativos de infecci\u00f3n fueron calculados a partir de los resultados obtenidos por la t\u00e9cnica de plaqueo (UFP\/mL) de sobrenadantes colectados del sistema de infecci\u00f3n ADE-DENV-2 (A), ELL-ELISA (B) y qPCR (C) de las monocapas celulares. En todos los casos, el control representa la infecci\u00f3n sin anticuerpos o compuesto, que se asumi\u00f3 como 100 % de infecci\u00f3n. Los asteriscos indican diferencias estad\u00edsticamente significativas respecto al control. (*p<0.5, **p<0.01, ***p<0.001 t-Student) y las barras de error indican el error est\u00e1ndar de la media (n: 4).<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_image src=\u00bbhttps:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/fig-4.png\u00bb title_text=\u00bbfig 4″ align=\u00bbcenter\u00bb _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb max_height=\u00bb450px\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb custom_padding=\u00bb||0px|||\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Figura 5.<\/strong> Infecci\u00f3n por DENV-3 mediada por el mecanismo ADE. Los porcentajes relativos de infecci\u00f3n fueron calculados a partir de los resultados obtenidos por la t\u00e9cnica de plaqueo (UFP\/mL) de sobrenadantes colectados del sistema de infecci\u00f3n ADE-DENV-3 (A), CELL-ELISA (B) y qPCR (C) de las monocapas celulares. En todos los casos, el control representa la infecci\u00f3n sin anticuerpos o compuesto que se asumi\u00f3 como 100 % de infecci\u00f3n. Los asteriscos indican diferencias estad\u00edsticamente significativas respecto al control. (*p<0.5, **p<0.01, ***p<0.001 t-Student) y las barras de error indican el error est\u00e1ndar de la media (n: 4).<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_image src=\u00bbhttps:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/fig-5.png\u00bb title_text=\u00bbfig 5″ align=\u00bbcenter\u00bb _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb max_width=\u00bb50%\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb custom_padding=\u00bb||0px|||\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Figura 6.<\/strong> Infecci\u00f3n por DENV-4 mediada por el mecanismo de ADE. Los porcentajes relativos de infecci\u00f3n fueron calculados a partir de los resultados obtenidos por la t\u00e9cnica de plaqueo (UFP\/mL) de sobrenadantes colectados del sistema de infecci\u00f3n ADE-DENV-4 (A), CELL-ELISA (B) y qPCR (C) de las monocapas celulares. En todos los casos, el control representa la infecci\u00f3n sin anticuerpos o compuesto, que se asumi\u00f3 como 100 % de infecci\u00f3n. Los asteriscos indican diferencias estad\u00edsticamente significativas respecto al control. (*p<0.5, **p<0.01, ***p<0.001 t-Student) y las barras de error indican el error est\u00e1ndar de la media (n: 4).<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_image src=\u00bbhttps:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/wp-content\/uploads\/2026\/02\/fig-6.png\u00bb title_text=\u00bbfig 6″ align=\u00bbcenter\u00bb _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb max_width=\u00bb50%\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.0″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb text_font_size=\u00bb17px\u00bb header_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb header_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb header_font_size=\u00bb17px\u00bb background_color=\u00bb#7f7f7f\u00bb width=\u00bb50%\u00bb width_tablet=\u00bb40%\u00bb width_phone=\u00bb100%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbleft\u00bb min_height=\u00bb40px\u00bb custom_margin=\u00bb0px||||false|false\u00bb custom_padding=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_tablet=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_phone=\u00bb10px||10px|0px|false|false\u00bb custom_padding_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb text_orientation_tablet=\u00bb\u00bb text_orientation_phone=\u00bbcenter\u00bb text_orientation_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb module_alignment_tablet=\u00bbleft\u00bb module_alignment_phone=\u00bbcenter\u00bb module_alignment_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Discusi\u00f3n<\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n S<\/span><\/strong>e han propuesto algunas hip\u00f3tesis para explicar los mecanismos asociados con la patogenia y las formas cl\u00ednicas de la infecci\u00f3n por DENV, entre ellos factores gen\u00e9ticos del virus que determinan su virulencia y potencial epid\u00e9mico. As\u00ed como tambi\u00e9n; el serotipo y cepa viral pueden influir en la actividad replicativa y el desarrollo de las formas graves del dengue. Con respecto a los factores del hospedero, se ha discutido sobre el papel patog\u00e9nico de la respuesta inmune en la progresi\u00f3n a la infecci\u00f3n secundaria, ya sea por el fen\u00f3meno de potenciaci\u00f3n dependiente de anticuerpos (ADE) o por el pecado antig\u00e9nico original (16). Tanto la respuesta inmune innata como la adaptativa desempe\u00f1an un papel importante en la protecci\u00f3n contra DENV, pero a la vez pueden inducir procesos patol\u00f3gicos que ponen en riesgo la salud de quienes presentan la enfermedad. Por lo tanto, comprender los mecanismos que regulan la protecci\u00f3n mediada por el sistema inmune frente a la patogenia, es fundamental para el desarrollo de estrategias terap\u00e9uticas y de prevenci\u00f3n eficaces contra el dengue (9,17).<\/p>\n Considerando que la inmunopatog\u00e9nesis y las formas cl\u00ednicas del dengue pueden ser dependientes del serotipo viral; en el presente trabajo se realiz\u00f3 la caracterizaci\u00f3n in vitro de la infecci\u00f3n de los cuatro serotipos DENV en funci\u00f3n del da\u00f1o celular (ECP) y la actividad replicativa, sobre las l\u00edneas celulares VERO y U937; las cuales han sido ampliamente utilizadas en otros estudios con DENV (14). Los resultados mostraron que en c\u00e9lulas VERO; el efecto citop\u00e1tico causado por cada uno de los serotipos DENV, fue mayor al 50 % (Figura 1A). Un resultado similar se obtuvo en otro estudio donde el serotipo DENV2 present\u00f3 un ECP del 75 % sobre las c\u00e9lulas VERO, luego de 5 d\u00edas postinoculaci\u00f3n (18). Otro estudio report\u00f3 un incremento en las vacuolas intracelulares y ac\u00famulos de c\u00e9lulas VERO inducidos por DENV-1 (19). En cambio, en las c\u00e9lulas U937 los serotipos DENV-1 y DENV-2 no indujeron ECP y el da\u00f1o celular asociado a DENV-3 y DENV-4 fue menor al 20%, luego de 96 horas posinfecci\u00f3n (Figura 1B). Lo anterior coincide con lo reportado en un estudio con dos cepas diferentes de DENV-2, donde se evidenci\u00f3 que la infecci\u00f3n con este serotipo no produjo cambios morfol\u00f3gicos en c\u00e9lulas U937 (20). Tambi\u00e9n se ha reportado ausencia de ECP por DENV-3 en c\u00e9lulas C6\/36 luego de 8 d\u00edas posinfecci\u00f3n (21). En c\u00e9lulas HeLa el serotipo DENV-1 no logr\u00f3 producir ECP (22). Un estudio sobre la mutag\u00e9nesis de la prote\u00edna NS2A de DENV revel\u00f3 un dominio responsable del efecto citop\u00e1tico inducido por el virus sobre las c\u00e9lulas HEK-293 (23). La actividad replicativa o cin\u00e9tica de crecimiento de DENV tambi\u00e9n fue diferente entre cada uno de los serotipos y l\u00edneas celulares. DENV-1 present\u00f3 su mayor replicaci\u00f3n a las 96 hpi en c\u00e9lulas VERO y U937 (Figura 2A), lo cual se correlaciona con los hallazgos encontrados en un estudio sobre infectividad viral, donde 3 cepas diferentes de DENV-1 presentaron mejores resultados a los 5 dpi; tanto en c\u00e9lulas VERO como HepG2 (24). DENV-2 mostr\u00f3 tener una actividad replicativa diferente entre ambas poblaciones celulares; en U937 se obtuvo la mayor replicaci\u00f3n viral a las 96 hpi, en cambio en c\u00e9lulas VERO a las 72 hpi (Figura 2B), lo cual coincide con un estudio sobre la curva de crecimiento de DENV-2 en c\u00e9lulas U937 donde el mayor t\u00edtulo viral se obtuvo a las 96 hpi (25). El serotipo DENV3 evidenci\u00f3 la mayor producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas (PFU\/mL) a las 72 hpi, tanto en c\u00e9lulas VERO como en U937 (Figura 2C). Por su parte, la replicaci\u00f3n de DENV4 mostr\u00f3 la mayor cuantificaci\u00f3n de PVI a las 96 hpi en ambas l\u00edneas celulares (Figura 2D). Resultados similares se obtuvieron en un experimento; donde se determin\u00f3 el t\u00edtulo viral para los cuatro serotipos DENV en c\u00e9lulas VERO, U937 y BHK-21 (25). Las diferencias encontradas tanto en el ECP como en la replicaci\u00f3n de los serotipos DENV pueden deberse a cambios en la expresi\u00f3n de los receptores celulares, v\u00edas de internalizaci\u00f3n, respuesta inmune celular, factores de transcripci\u00f3n y traducci\u00f3n, microambiente celular entre otros factores celulares espec\u00edficos que son claves para la replicaci\u00f3n viral, as\u00ed como tambi\u00e9n a las diferencias gen\u00e9ticas y antig\u00e9nicas entre cada uno de los serotipos DENV. Luego del an\u00e1lisis de la infecci\u00f3n primaria de cada uno de los serotipos DENV, se plante\u00f3 investigar algunos aspectos asociados con la infecci\u00f3n secundaria; para lo cual se estableci\u00f3 un modelo de infecci\u00f3n in vitro con los cuatro serotipos DENV mediado por el mecanismo dependiente de anticuerpos (ADE), utilizando la l\u00ednea celular U937. Este sistema permiti\u00f3 monocitos humanos, donde sueros humanos con inmunidad previa contra DENV-2, 3 o 4 potenciaron significativamente la infecci\u00f3n por DENV-1 (26). Otro estudio demostr\u00f3 que anticuerpos maternos contra serotipos distintos a DENV-1 potenciaron la infecci\u00f3n y enfermedad grave en lactantes infectados con DENV-1 (27). Adem\u00e1s, c\u00e9lulas primarias humanas y modelos murinos con infecciones por DENV-1 evidenciaron que la infecci\u00f3n se potenci\u00f3 en presencia de anticuerpos heterot\u00edpicos (28). Expuesto lo anterior el DENV1 est\u00e1 implicado tanto en el desarrollo de infecciones primarias como secundarias y en la progresi\u00f3n a las manifestaciones cl\u00ednicas graves de la enfermedad (29). Por su parte los anticuerpos Anti-DENV-2 mostraron un resultado antag\u00f3nico; con una reducci\u00f3n significativa de la infecci\u00f3n por DENV-1 en t\u00e9rminos de genoma, prote\u00edna viral y PVI (Figura 3 A, B y C), lo cual puede asociarse a que la concentraci\u00f3n de anticuerpos usada en el ensayo logr\u00f3 el espacio necesario para alcanzar el umbral de neutralizaci\u00f3n del virus, limitando de esta forma la uni\u00f3n e internalizaci\u00f3n viral y las subsecuentes etapas del ciclo replicativo de DENV.<\/p>\n La infecci\u00f3n por DENV-2 mediada por anticuerpos homot\u00edpicos se neutraliz\u00f3 significativamente, evidenciando una reducci\u00f3n en la cuantificaci\u00f3n de copias gen\u00f3micas, prote\u00ednas virales y PVI. En contraste, los anticuerpos heterot\u00edpicos potenciaron la producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas de DENV-2; los anticuerpos Anti-DENV-1 la potenciaron 5.8 veces, Anti-DENV-3, 6. 8 veces y Anti-DENV-4, 90 veces. Sin embargo, la cuantificaci\u00f3n de copias gen\u00f3micas y prote\u00edna viral no mostr\u00f3 diferencias En el modelo de infecci\u00f3n DENV-3-ADE, los resultados de cuantificaci\u00f3n de genoma y PVI indicaron que los anticuerpos homot\u00edpicos neutralizaron la infecci\u00f3n en un 100 %, un resultado similar se obtuvo para la mediaci\u00f3n con Anti-DENV-2. Adem\u00e1s, se evidenci\u00f3 que los anticuerpos heterot\u00edpicos Anti-DENV-1 y Anti-DENV-4 tambi\u00e9n indujeron una reducci\u00f3n significativa en la producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas y copias gen\u00f3micas virales (Figura 5 A, B y C). Lo anterior puede ser indicativo que la concentraci\u00f3n de anticuerpos utilizada en el ensayo no represent\u00f3 niveles Los resultados de cuantificaci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas y prote\u00edna viral demostraron que la infecci\u00f3n por DENV-1 se neutraliz\u00f3 significativamente en presencia de anticuerpos homot\u00edpicos, en cambio los Ac heterot\u00edpicos Anti-DENV-3 y Anti-DENV-4 potenciaron la infecci\u00f3n 3.9 y 4.2 veces respectivamente, en comparaci\u00f3n con el control de infecci\u00f3n primaria. Estos resultados se correlacionan con los obtenidos para la prote\u00edna viral; cuya reducci\u00f3n puede deberse a que parte de estas son usadas en la formaci\u00f3n de nuevos viriones o PVI (Figura 3 A y B). Hallazgos La infecci\u00f3n por DENV-2 mediada por anticuerpos homot\u00edpicos se neutraliz\u00f3 significativamente, evidenciando una reducci\u00f3n en la cuantificaci\u00f3n de copias gen\u00f3micas, prote\u00ednas virales y PVI. En contraste, los anticuerpos heterot\u00edpicos potenciaron la producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas de DENV-2; los anticuerpos Anti-DENV-1 la potenciaron 5.8 veces, Anti-DENV-3, 6. 8 veces y Anti-DENV-4, 90 veces. Sin embargo, la cuantificaci\u00f3n de copias gen\u00f3micas y prote\u00edna viral no mostr\u00f3 diferencias significativas en comparaci\u00f3n con el control de infecci\u00f3n primaria (Figura 4 A, B y C), lo cual puede estar asociado con la alta producci\u00f3n de nuevas PVI. Resultados similares se obtuvieron en un estudio con macr\u00f3fagos U937-DC-SIGN donde la infecci\u00f3n por DENV-2 se potenci\u00f3 en presencia de anticuerpos monoclonales 4G2 (30). Otro estudio con macr\u00f3fagos humanos primarios evidenci\u00f3 una mejora de la infecci\u00f3n por DENV-2 mediada por anticuerpos monoclonales, donde se obtuvo un incremento de 6, 8 veces en la cuantificaci\u00f3n de PVI (31). Un estudio in vivo tambi\u00e9n demostr\u00f3 que la inmunizaci\u00f3n previa con DENV-1 potenci\u00f3 la infecci\u00f3n de DENV-2 con un incremento en la carga viral, as\u00ed como en las formas graves de la enfermedad (27).<\/p>\n En el modelo de infecci\u00f3n DENV-3-ADE, los resultados de cuantificaci\u00f3n de genoma y PVI indicaron que los anticuerpos homot\u00edpicos neutralizaron la infecci\u00f3n en un 100 %, un resultado similar se obtuvo para la mediaci\u00f3n con Anti-DENV-2. Adem\u00e1s, se evidenci\u00f3 que los anticuerpos heterot\u00edpicos Anti-DENV-1 y Anti-DENV-4 tambi\u00e9n indujeron una reducci\u00f3n significativa en la producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas y copias gen\u00f3micas virales (Figura 5 A, B y C). Lo anterior puede ser indicativo que la concentraci\u00f3n de anticuerpos utilizada en el ensayo no represent\u00f3 niveles La infecci\u00f3n por DENV-4 tambi\u00e9n se neutraliz\u00f3 en presencia de anticuerpos homot\u00edpicos con una reducci\u00f3n significativa en la cuantificaci\u00f3n del genoma viral y PVI. Un resultado similar se evidenci\u00f3 con Anti-DENV-2. Los anticuerpos heterot\u00edpicos Anti-DENV-1 tambi\u00e9n redujeron la producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas; en cambio los anticuerpos AntiDENV-3 potenciaron la replicaci\u00f3n viral con un incremento del 1,7 veces en la cuantificaci\u00f3n de copias gen\u00f3micas virales, en comparaci\u00f3n con el control de infecci\u00f3n primaria. Sin embargo, no hubo incremento en la producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas (Figura 6 A, B y C), esto sugiere que probablemente etapas posteriores a la replicaci\u00f3n; como la traducci\u00f3n, ensamblaje, maduraci\u00f3n o liberaci\u00f3n no se llevaron a cabo eficazmente impidiendo la formaci\u00f3n de nuevas PVI. Resultados obtenidos en un estudio demostraron que DENV-4 en presencia de anticuerpos monoclonales IgG aument\u00f3 la infectividad de las c\u00e9lulas U937 de forma dependiente a la concentraci\u00f3n de anticuerpos (30). Otro estudio encontr\u00f3 que aislamientos cl\u00ednicos de DENV-4 mostraron una potenciaci\u00f3n de la infecci\u00f3n en c\u00e9lulas U937 en presencia de anticuerpos, pero no se logr\u00f3 el mismo efecto con cepas adaptadas de laboratorio (34). Lo anterior sugiere; que las diferencias encontradas en este modelo pueden deberse a variaciones en la afinidad que pueden tener cada uno de los anticuerpos por los sitios de uni\u00f3n del virus, as\u00ed como tambi\u00e9n a la concentraci\u00f3n de anticuerpos que determinan su efecto neutralizante o subneutralizante sobre la infecci\u00f3n. En general, nuestros resultados demuestran que en la infecci\u00f3n con DENV los anticuerpos juegan un papel dual en el desarrollo y evoluci\u00f3n de esta. De acuerdo con las propiedades y cantidades de los anticuerpos hom\u00f3logos o heter\u00f3logos, la interacci\u00f3n virus-anticuerpo puede ser protectora o potenciadora de la infecci\u00f3n. El n\u00famero de mol\u00e9culas de Acs requeridas para neutralizar la infectividad, es un tema que ha sido ampliamente estudiado y para el caso de los flavivirus; se ha descrito que la inactivaci\u00f3n ocurre en funci\u00f3n del n\u00famero de mol\u00e9culas de anticuerpos unidas al virus (30).<\/p>\n Finalmente, los resultados confirmaron que el sistema de infecci\u00f3n in vitro con c\u00e9lulas U937 permiti\u00f3 caracterizar la infecci\u00f3n primaria de los cuatro serotipos DENV y a la vez establecer un modelo de infecci\u00f3n mediado por el mecanismo de potenciaci\u00f3n dependiente de anticuerpos, donde se logr\u00f3 analizar el efecto neutralizante y subneutralizante de los anticuerpos homot\u00edpicos y heterot\u00edpicos sobre la infecci\u00f3n por DENV. Adem\u00e1s, permite estudiar aspectos relacionados con la patog\u00e9nesis, respuesta inmune y ensayos antivirales que pueden implementarse para el desarrollo de estrategias terap\u00e9uticas y de controles eficaces contra el dengue.<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb text_font_size=\u00bb17px\u00bb header_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb header_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb header_font_size=\u00bb17px\u00bb background_color=\u00bb#7f7f7f\u00bb width=\u00bb50%\u00bb width_tablet=\u00bb40%\u00bb width_phone=\u00bb100%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbleft\u00bb min_height=\u00bb40px\u00bb custom_margin=\u00bb0px||||false|false\u00bb custom_padding=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_tablet=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_phone=\u00bb10px||10px|0px|false|false\u00bb custom_padding_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb text_orientation_tablet=\u00bb\u00bb text_orientation_phone=\u00bbcenter\u00bb text_orientation_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb module_alignment_tablet=\u00bbleft\u00bb module_alignment_phone=\u00bbcenter\u00bb module_alignment_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Conclusi\u00f3n<\/strong><\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n L<\/span><\/strong>a caracterizaci\u00f3n de la infecci\u00f3n primaria por DENV en las l\u00edneas celulares VERO y U937 fue diferente entre cada uno de los cuatro serotipos. El efecto citop\u00e1tico evidenci\u00f3 ser mayor en c\u00e9lulas VERO en comparaci\u00f3n con las c\u00e9lulas U937. De la misma forma; la actividad replicativa de DENV mostr\u00f3 diferencias significativas entre los serotipos y las l\u00edneas celulares evaluadas. Por su parte en la infecci\u00f3n secundaria mediada por anticuerpos, \u00fanicamente los serotipos DENV-1 y DENV-2 potenciaron la producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas en presencia de anticuerpos heterot\u00edpicos, encontr\u00e1ndose que la concentraci\u00f3n de anticuerpos monoclonales (25 ng\/uL) usada en el modelo de infecci\u00f3n DENV-ADE, tuvo un efecto neutralizante o subneutralizante dependiente del serotipo viral.<\/p>\n El efecto citop\u00e1tico causado por DENV fue diferente entre cada una de las l\u00edneas celulares, en c\u00e9lulas VERO los cuatro serotipos DENV indujeron un ECP mayor al 50 %, en cambio en c\u00e9lulas U937, los serotipos DENV-1 y DENV-2 no causaron cambios morfol\u00f3gicos y el da\u00f1o celular asociado a la infecci\u00f3n por DENV-3 y DENV-4 fue inferior al 20 %. La actividad replicativa o cin\u00e9tica de crecimiento de DENV fue diferente entre cada uno de los serotipos y l\u00edneas celulares, DENV-1 y DENV-2 evidenciaron la mayor producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas a las 96 hpi, tanto en c\u00e9lulas VERO como en U937. El serotipo DENV-2 present\u00f3 su mejor replicaci\u00f3n a las 96 hpi en c\u00e9lulas U937 y en c\u00e9lulas VERO a las 72 hpi. Por su parte DENV-3 tuvo su mejor actividad replicativa a las 72 hpi en ambas l\u00edneas celulares. La infecci\u00f3n por cada uno de los serotipos DENV se neutraliz\u00f3 en presencia de anticuerpos homot\u00edpicos. Los anticuerpos Anti-DENV-2 tambi\u00e9n mostraron un efecto neutralizante contra los tres serotipos heter\u00f3logos de DENV. Los anticuerpos Anti-DENV-3 presentaron un efecto subneutralizante contra los tres serotipos heter\u00f3logos de DENV, favoreciendo el mecanismo de infecci\u00f3n dependiente de anticuerpos. La infecci\u00f3n por DENV-1 mediada por anticuerpos heterot\u00edpicos se potenci\u00f3 en presencia de Anti-DENV-3 y Anti-DENV-4. Por otro lado DENV-2 se potenci\u00f3 en presencia de cada uno de los anticuerpos heterot\u00edpicos Anti-DENV. El serotipo DENV-3 no evidenci\u00f3 mejora de la infecci\u00f3n por los anticuerpos heterot\u00edpicos y DENV-4 \u00fanicamente se potenci\u00f3 con los anticuerpos Anti-DENV-3.<\/p>\n A partir de los resultados se pretende establecer el modelo de infecci\u00f3n con DENV, mediado por el mecanismo de potenciaci\u00f3n dependiente de anticuerpos, en c\u00e9lulas primarias como PBMC o en modelos animales que permitan acercarnos m\u00e1s al contexto natural de la infecci\u00f3n. Adem\u00e1s, integrar estudios de prote\u00f3mica y metabol\u00f3mica a manera que se pueda comprender o dilucidar procesos o v\u00edas metab\u00f3licas implicadas en la patog\u00e9nesis de la infecci\u00f3n primaria y secundaria por DENV. Adaptar nuestro modelo de infecci\u00f3n DENV-ADE a investigaciones que eval\u00faan compuestos con potencial Anti-DENV, a fin de comprender los efectos y posibles mecanismos de acci\u00f3n en la infecci\u00f3n mediada por anticuerpos e integrar otras t\u00e9cnicas moleculares, serol\u00f3gicas e inmunol\u00f3gicas, con el objetivo de profundizar y validar cada uno de nuestros resultados.<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.0″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb text_font_size=\u00bb17px\u00bb header_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb header_text_color=\u00bb#FFFFFF\u00bb header_font_size=\u00bb17px\u00bb background_color=\u00bb#7f7f7f\u00bb width=\u00bb50%\u00bb width_tablet=\u00bb40%\u00bb width_phone=\u00bb100%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbleft\u00bb min_height=\u00bb40px\u00bb custom_margin=\u00bb0px||||false|false\u00bb custom_padding=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_tablet=\u00bb10px||10px|170px|false|false\u00bb custom_padding_phone=\u00bb10px||10px|0px|false|false\u00bb custom_padding_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb text_orientation_tablet=\u00bb\u00bb text_orientation_phone=\u00bbcenter\u00bb text_orientation_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb module_alignment_tablet=\u00bbleft\u00bb module_alignment_phone=\u00bbcenter\u00bb module_alignment_last_edited=\u00bbon|phone\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n Referencias<\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=\u00bb4.27.4″ _module_preset=\u00bbdefault\u00bb text_font=\u00bbCambria||||||||\u00bb text_text_color=\u00bb#000000″ text_font_size=\u00bb13px\u00bb width=\u00bb65%\u00bb width_tablet=\u00bb80%\u00bb width_phone=\u00bb70%\u00bb width_last_edited=\u00bbon|tablet\u00bb module_alignment=\u00bbcenter\u00bb global_colors_info=\u00bb{}\u00bb]<\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column_inner][\/et_pb_row_inner][\/et_pb_column][\/et_pb_section]<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" El objetivo general es analizar las acciones de cuidado de salud realizadas por mujeres del hogar de personas con discapacidad.<\/p>\n","protected":false},"author":5,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_et_pb_use_builder":"on","_et_pb_old_content":"","_et_gb_content_width":"1080","footnotes":""},"categories":[38,35,34],"tags":[],"class_list":["post-10383","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-articulos-originales-articulos-vol-2-no-2","category-articulos-vol-2-no-2","category-vol-2-no-2"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/10383","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/users\/5"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=10383"}],"version-history":[{"count":4,"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/10383\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":10414,"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/10383\/revisions\/10414"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=10383"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=10383"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/recides.sedesol.gob.hn\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=10383"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}\n
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Aceptado\/Accepted: 08-07-25<\/p>\nResumen<\/strong><\/h1>\n
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The objective of this study was to establish an in vitro model of infection with the four DENV serotypes, mediated by the ADE mechanism. Methodology: A growth curve was performed with VERO and U937 cells infected with each DENV serotype at an MOI of 1; supernatants were collected from 24 to 96 hpi to quantify infectious viral particles by plating and cytopathic effect (MTT). For the DENV-ADE model, virus-specific monoclonal antibody mixtures were inoculated onto U937 cells, and su pernatants were collected at 48 hpi to quantify PVI. The monolayers were used to determine viral genome (RT-qPCR) and viral protein (CELL-ELISA). In addition, relative cytokine expression was assessed by RT qPCR. Results: The CPE of all four serotypes was greater than 50% in VERO cells; in U937, DENV-3 and DENV-4 caused cell damage up to 96 hpi. Replication of DENV-1 and DENV-4 was similar in both cell lines. DENV-2 presented the highest replication at 72 hpi in VERO and 96 hpi in U937. The highest replicative activity for DENV-3 was obtained at 72 hpi.
Heterotypic Anti-DENV antibodies enhanced PVI for DENV-1 and DENV-2 serotypes, and Anti-DENV-2 neutralized infection by all four serotypes. In ADE-DENV-2 infection, IL-6 expression increased proportionally with PVI, and TNF-a did not differ between primary and secondary DENV infections. Conclusions: DENV-CPE was higher in VERO cells than in U937 cells, and replication activity differed between serotypes and cell lines. In ADE infection, DENV-1 and DENV-2 enhanced PVI production by heterotypic antibodies, and IL-6 expression increased in ADE-DENV-2 infection.<\/p>\n
Las monocapas de cada una de las condiciones experimentales se fijaron con PFA 4 % durante 30 min a temperatura ambiente, se lavaron 3 veces con PBS 1x y luego se permeabilizaron con 0.1 % de Triton X-100 durante 30 minutos. Posteriormente se inactivaron las peroxidasas end\u00f3genas celulares con 0.3 % de H\u2082O\u2082 en 10 % metanol diluido en PBS y se incub\u00f3 por 30 min. El bloqueo de sitios inespec\u00edficos se hizo con SFB 10 % diluido en PBS y se incub\u00f3 por 30 min a TA. Seguidamente se agregaron los anticuerpos primarios Anti-DENV seg\u00fan serotipo y se incub\u00f3 durante toda la noche a 4 \u00b0C. Al d\u00eda siguiente se hicieron lavados de las monocapas y se adicion\u00f3 el anticuerpo secundario anti-rat\u00f3n IgG acoplado a peroxidasa de BioRad y se incub\u00f3 por 1 hora a TA. Se realiz\u00f3 un \u00faltimo lavado de las monocapas para agregar el sustrato TMB (3, 3\u00b4 ,5 ,5\u00b4-Tetrametilbenzidina) el cual se incub\u00f3 por 15 min y posteriormente se hicieron lecturas de las absorbancias a 450 nm en el lector de ELISA Multiskan\u2122 FC Microplate Photometer (Thermo Scientific). Adicionalmente, se agreg\u00f3 \u00e1cido clorh\u00eddrico 1 N y se hicieron lecturas a la longitud de onda de 450 nm.<\/p>\n
Los cebadores para DENV-1 amplifican una regi\u00f3n de 208 pb.<\/p>\n\n
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c\u00e9lulas U937 luego de 72 hpi.<\/p>\n
significativas en comparaci\u00f3n con el control de infecci\u00f3n primaria (Figura 4 A, B y C), lo cual puede estar asociado con la alta producci\u00f3n de nuevas PVI. Resultados similares se obtuvieron en un estudio con macr\u00f3fagos U937-DCSIGN donde la infecci\u00f3n por DENV-2 se potenci\u00f3 en presencia de anticuerpos monoclonales 4G2 (30). Otro estudio con macr\u00f3fagos humanos primarios evidenci\u00f3 una mejora de la infecci\u00f3n por DENV-2 mediada por anticuerpos monoclonales, donde se obtuvo un incremento de 6, 8 veces en la cuantificaci\u00f3n de PVI (31). Un estudio in vivo tambi\u00e9n demostr\u00f3 que la inmunizaci\u00f3n previa con DENV-1 potenci\u00f3 la infecci\u00f3n de DENV-2 con un incremento en la carga viral, as\u00ed como en las formas graves de la enfermedad (27).<\/p>\n
subneutralizantes capaces de inducir la opsonizaci\u00f3n del virus y la consecuente fagocitosis de este, que pudiera potenciar la infecci\u00f3n. Esto tambi\u00e9n se correlaciona con lo reportado en otras investigaciones, donde se caracterizar la infecci\u00f3n en presencia de anticuerpos homot\u00edpicos y heterot\u00edpicos, en cuanto a producci\u00f3n de part\u00edculas virales infecciosas (UFP\/mL), prote\u00ednas y copias gen\u00f3micas virales.<\/p>\n
similares se obtuvieron en un ensayo con c\u00e9lulas K562 y monocitos humanos, donde sueros humanos con inmunidad previa contra DENV-2, 3 o 4 potenciaron significativamente la infecci\u00f3n por DENV-1 (26). Otro estudio demostr\u00f3 que anticuerpos maternos contra serotipos distintos a DENV-1 potenciaron la infecci\u00f3n y enfermedad grave en lactantes infectados con DENV-1 (27). Adem\u00e1s, c\u00e9lulas primarias humanas y modelos murinos con infecciones por DENV-1 evidenciaron que la infecci\u00f3n se potenci\u00f3 en presencia de anticuerpos heterot\u00edpicos (28). Expuesto lo anterior el DENV-1 est\u00e1 implicado tanto en el desarrollo de infecciones primarias como secundarias y en la progresi\u00f3n a las manifestaciones cl\u00ednicas graves de la enfermedad (29). Por su parte los anticuerpos Anti-DENV-2 mostraron un resultado antag\u00f3nico; con una reducci\u00f3n significativa de la infecci\u00f3n por DENV-1 en t\u00e9rminos de genoma, prote\u00edna viral y PVI (Figura 3 A, B y C), lo cual puede asociarse a que la concentraci\u00f3n de anticuerpos usada en el ensayo logr\u00f3 el espacio necesario para alcanzar el umbral de neutralizaci\u00f3n del virus, limitando de esta forma
la uni\u00f3n e internalizaci\u00f3n viral y las subsecuentes etapas del ciclo replicativo de DENV.<\/p>\n
subneutralizantes capaces de inducir la opsonizaci\u00f3n del virus y la consecuente fagocitosis de este, que pudiera potenciar la infecci\u00f3n. Esto tambi\u00e9n se correlaciona con lo reportado en otras investigaciones, donde se ha documentado que los anticuerpos generados en la infecci\u00f3n primaria pueden ejercer una neutralizaci\u00f3n heterot\u00edpica transitoria; sobre todo, cuando los t\u00edtulos serol\u00f3gicos de anticuerpos son altos (32). Un estudio con DENV-3 en c\u00e9lulas U937 en las que se usaron diferentes concentraciones de anticuerpos IgG mostr\u00f3 que la mejora de la infecci\u00f3n fue inversamente proporcional con la concentraci\u00f3n de anticuerpos, donde la mayor concentraci\u00f3n de anticuerpos ensayada caus\u00f3 una reducci\u00f3n significativa de la infecci\u00f3n, lo cual justifica el hallazgo encontrado en el presente estudio (30,33).<\/p>\n\n
Infect Drug Resist. 2019; 12: 1833-52.<\/li>\n